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高中生物学
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综合题
1.
(2023高三上·梅州模拟)
人乳铁蛋白(hLF)广泛分布于乳汁等外分泌液,初乳中含量较高,对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究,主要流程如图,图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶切点,neor为新霉素抗性基因,BLG基因为β乳球蛋白基因,GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答下列问题:
(1) 过程①方法的基本原理是先以人乳腺细胞总RNA为模板通过逆转录合成cDNA(互补DNA),再通过PCR技术扩增相应的DNA片段—hLF基因。但是过程①中,不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR,这是因为
,在RT-PCR过程中,加入的引物需在
端添加
(填限制酶切点)限制酶的识别序列,以便于hLF基因插入pEB质粒中。
(2) 过程②中,hLF基因插入到BLG基因之后,利用后者的启动子的目的是
。
(3) 将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养,能够存活的细胞应该是导入了
的细胞,再观察山羊乳腺上皮细胞是否有
以筛选出转染成功的细胞。
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