1. (2023高三上·宜丰月考) 酯酶结合荧光分析法可对有机磷和氨基甲酸酯类农药进行检测，某研究院利用转基因技术获得一种催化效率高、农药敏感性强的微生物酯酶，图是此基因工程操作时用到的质粒，其中不同数字代表不同的限制酶切点，回答下列问题：

1. （1） 基因工程的核心操作是。在此核心操作过程中应选用（填图中数字）两种限制酶切割目的基因和质粒，选用两种酶而不选择一种酶进行切割的目的是。除图示外，该质粒若作为载体还必须具有的结构。
3. （2） 人工合成酯酶基因后通过PCR技术可实现扩增，该过程需要的原料是；设计引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的（填3′端或5′端）开始连接脱氧核苷酸。为方便构建得到重组质粒，需要在引物的5′端设计酶的识别序列。目的基因的序列如下图所示，应选择引物。（①-④中前3个加粗碱基表示保护碱基。）

   

   ①5′-CCGATGCTTGATATGCCAATC-3′

   ②3′-CCGATGCTTGATATGCCAATC-5′

   ③5′-CCGCTAGTCGAACACAAGAAG-3′

   ④3′-CCGCTAGTCGAACACAAGAAG-5′

5. （3） 将PCR产物和质粒用限制酶酶切，酶切产物纯化后，用DNA连接酶连接，此酶按来源不同有两类，即DNA连接酶和DNA连接酶。连接的产物导入大肠杆菌前需处理大肠杆菌，使其处于感受态。