1. 透明质酸(HA)又称玻尿酸，是一种具有高黏度氨基多糖，也是重要的医学材料和化妆品添加原料。枯草芽孢杆菌无透明质酸合成酶(HAS)，但含有 HA代谢的其它途径，而动物病原体链球菌含有HAS的基因(H基因)。研究者通过基因工程来改变枯草芽孢杆菌代谢通路，以实现枯草芽孢杆菌生产 HA。

1. （1） 目的基因的获取和扩增：链球菌破碎后提取 DNA，经酶切割获取H基因。PCR扩增目的基因，需要根据H基因设计合适的引物，是由于 DNA 聚合酶发挥作用时需要引物参与形成作为核苷酸缩合作用的起点；DNA 聚合酶在延伸子链时需要把核苷酸加到端。
3. （2） 表达载体的构建：下图为H基因与p质粒示意图，其中H基因以a链为转录模板链。为通过添加诱导剂来控制H基因的表达，研究者选择了含木糖诱导型启动子的p质粒。为了使下图中酶切后的H基因按照正确的方向与p质粒连接，p质粒位点1和2所对应的酶分别是。酶切后加入酶催化重组质粒形成。

   

5. （3） 表达载体的导入与筛选：将构建好的重组质粒转入经处理的枯草芽孢杆菌，在含的培养基上筛选，得到枯草芽孢杆菌A。
7. （4） 菌种的扩大培养：配制(填“液体”或“固体”)培养基，成分有水、无机盐、蛋白胨和酵母提取物，其中蛋白胨为微生物生长主要提供；调整 pH；灭菌；枯草芽孢杆菌 A 接种到摇瓶培养。
9. （5） 大型发酵：进行现代工业发酵时，在发酵罐加入适宜的培养基外，还需严格控制等发酵条件。经扩大培养的枯草芽孢杆菌A 接种 定时间后添加，诱导合成HA。HA 对枯草芽孢杆菌来说属于(填“初生代谢产物”或“次生代谢产物”)。
11. （6） 产品输出：发酵液中大部分为水，发酵产物浓度较低；发酵液中悬浮固形物主要是菌体和蛋白质的胶状物，故最后对发酵产物进行，获得所需产品。