①coffeine(咖啡因)处理法,用5×10-5M的coffeine处理蚕豆根尖半小时,充分冲洗后恢复培养27小时,再用0.2%秋水仙素处理1.5小时,固定、制片、计数。Coffeine可以阻断细胞质分裂,细胞停留在,后经秋水仙素处理,可以得到大量细胞。
②DNA合成双阻断法,高浓度TdR(脱氧胸苷)可以抑制DNA复制不影响其他分裂时期,对S期细胞毒性最小,洗脱(除去TdR)后细胞继续分裂。团队利用两次阻断和两次洗脱方法处理细胞,过程如下表,结合图3细胞分裂各时期所占时间,完成下列实验。
顺序 | 处理 | 目的 | 时间 |
第一次阻断 | 加入过量TdR | 使细胞群中细胞阻断在和G1/S交界处。 | T1≥h。 |
第一次洗脱 | 洗脱,更新培养液 | 除去阻断剂,使细胞分裂正常。 | 6h≤T2≤15h |
第二次阻断 | 加入过量TdR | 使细胞全部停留在。 | T3取决于T2 T3+T2≥21h |
第二次洗脱 | 洗脱,更新培养液 | 除去阻断剂,全部细胞同步进入细胞周期 |