资料一:人原癌基因 erbB2编码的p185蛋白可存在于肿瘤细胞膜上,erbB2的过量表达与肿瘤细胞侵袭、转移密切相关,人体自身免疫系统通常不会产生相应抗体。
抗体由细胞分泌,可将注入小鼠体内,经杂交瘤技术获得相应的鼠源单克隆抗体, 以期治疗肿瘤。
资料二:鼠源抗体的恒定区易被人体免疫系统识别而失去作用,研制、接种人-鼠嵌合抗体(简称M抗体)可降低免疫排斥, 用于肿瘤治疗。鼠源、人源抗体结构如图甲所示。
可将图示中的与组合,设计出M 抗体。
资料三:获得相关基因后,利用PCR技术进行融合得到目的基因,可选择与乳腺细胞表达载体pBC1构建重组DNA分子。 目的基因、表达载体pBCl如图乙所示。
注:Pl为山羊乳腺特异性表达启动子,P2 为四环素诱导启动子(必须在四环素存在时才能起作用);限制酶 Mbo I、XbaI与 ScaI的识别序列均不相同。
①PCR扩增图示目的基因时需加入种引物和酶。
②本实验应选择限制酶切割目的基因与pBCl载体,将酶切产物正确连接后形成重组 DNA分子, 以便后续通过荧光检测筛选。
资料四:培育转基因小鼠,让目的基因在小鼠乳腺中表达。经检测,M抗体的相关基因都能表达,也能组装并分泌M 抗体。
①通常将重组DNA分子导入小鼠的(填细胞名称),在培养液中加入后,发出荧光的即为目标细胞,再经过等胚胎工程技术获得转基因小鼠。
②通过技术检测小鼠乳汁中的M抗体水平,发现其含量较低,原因可能有、M 抗体的组装及分泌过程受阻等。