1. (2024·义乌模拟) 在现代生物学中，PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）是一项必不可少的技术，它可以复制出大量的DNA片段，为基因工程和分子诊断等提供了有力的技术支撑。

1. （1） 已知酵母菌不能吸收淀粉，若想使新型酵母菌可以直接利用淀粉发酵，则应导入多步分解淀粉所需的多种酶，推测这些酶生效的场所应该是（填“细胞内”和“细胞外”）。
3. （2） 同源切割是一种代替将目的基因导入基因表达载体的方法。当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。研究人员，运用同源切割的方式，在目的基因两端加上一组同源序列A，B，已知酵母菌体内DNA有许多A-B序列位点可以同源切割插入。构建完成的目的基因结构如图，则应选择图中的引物对目的基因进行PCR。PCR反应体系中需加入模板、、、引物、Mg²⁺、缓冲液等。

   

5. （3） 已知酵母菌不能合成尿嘧啶，因此尿嘧啶合成基因（UGA）常用作标记基因，又知尿嘧啶可以使5-氟乳清酸转化为对酵母菌有毒物质。

   （i）导入目的基因的酵母菌应在的培养基上筛选培养。

   （ii）由于需要导入多种酶基因，需要多次筛选，因此在导入一种目的基因后，要切除UGA基因，再重新导入。切去UGA基因的酵母菌应在的培养基上筛选培养。

7. （4） 家畜胚胎性别鉴定对畜牧业发展具有重要意义，科研人员利用PCR技术扩增奶牛Y染色体上雄性决定基因(SRY)和常染色体上的酪蛋白基因(CSN1S1)，进行早期胚胎性别鉴定和胚胎移植，获得高产奶牛。请完成下表相关内容。

   实验目的	方法步骤要点
   囊胚样品DNA提取	选取细胞提取DNA
   PCR引物的设计和合成	根据牛的SRY和CSN1S1基因序列设计合成引物
   PCR扩增	预变性→变性→退火→延伸
   鉴定分析
   	对受体奶牛注射孕激素（或前列腺素）
   胚胎移植	将符合要求的胚胎移植到受体奶牛的子宫内

9. （5） PCR过程中反应温度最低的一步是，该步骤温度设置与引物的、、相关。