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  • 1. (2024高三上·东莞期末)  堪称“基因魔剪”的CRISPR/Cas9基因编辑技术在育种中有重要作用。CRISPR/Cas9系统转录出的具有序列特异性的单向导RNA(sgRNA)能引导Cas9蛋白靶向结合目的基因的特定序列并对其切割,如图A所示。断开双链的目的基因在修复过程中会发生碱基的插入、缺失或替换,从而实现对目的基因的编辑。水稻的OsSWEET11基因(位于11号染色体上)是被白叶枯病菌广泛利用的感病基因。利用CRISPR/Cas9技术可实现对水稻OsSWEET11基因进行“敲除”。图B是利用农杆菌Ti质粒构建的表达载体。

    回答下列问题:

    1. (1) 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对水稻OsSWEET11基因进行“敲除”,需要依据的某段序列设计sgRNA,根据sgRNA序列合成双链DNA,可通过测序技术或技术验证该双链DNA的纯度和完整性。
    2. (2) 实施转基因操作时,需先将图B所示表达载体导入农杆菌,再让农杆菌感染野生型水稻愈伤组织,从而实现对愈伤组织细胞中OsSWEET11基因的“敲除”。此过程中,潮霉素抗性基因的作用是
    3. (3) 将转基因操作后的愈伤组织进行培养,获得甲、乙、丙三棵植株,在个体生物学水平上对这三棵植株进行抗白叶枯病菌的鉴定,方法是。结果显示甲植株感病,乙植株不感病,丙植株感病程度介于两者之间,从CRISPR/Cas9基因编辑技术对细胞目的基因“敲除”的数量角度考虑,对丙植株的感病情况作出合理猜测:
    4. (4) 利用丙植株为材料,运用遗传学的知识,设计实验验证你上述猜测。请写出实验思路:,若后代不感病植株比例为则支持你的猜测。

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