1. (2024高三上·汕头期末)  丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的一种传染病，其包膜蛋白中包含6个保守序列Bp蛋白和抗原表位R9蛋白。免疫佐剂热敏肠毒素B单位（LTB）是一种免疫增强剂。为研制针对HCV的多肽疫苗，某研究小组拟先构建针对该病毒的多表位疫苗基因的重组质粒，操作流程如图1、图2所示。请回答以下问题：

1. （1） 图1为利用融合PCR技术获得LTB-R9-Bp融合基因的过程，反应体系中需加入待扩增的模板、引物、原料以及。引物P2与P3设计时要求除了考虑引物的碱基数量、与模板链的特异性结合之外，还需要。请在下图中标出②过程两条模板链的5’端和3’端。

   

3. （2） 获得LTB-R9-Bp融合基因后，若要大量扩增该序列，可选择图中引物继续进行PCR。利用电泳技术对扩增结果进行检测，发现除目标条带外还有其他非特异性扩增条带，原因可能有。

   A．模板DNA被污染        

   B．引物特异性不强        

   C．加入原料过多

5. （3） 图2构建融合基因表达载体时，质粒上除了复制起点、标记基因和多个限制酶的识别序列外，还需要有。将得到的重组质粒导入低温、低浓度的处理的大肠杆菌，完成转化实验。