1. (2024高三下·内江月考)  为使玉米获得抗除草剂性状，科研人员进行了相关操作（如图所示）。含有内含子的报告基因不能在原核生物中正确表达，其正确表达产物能催化无色物质K呈现蓝色。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。回答下列问题：

    

1. （1） 为获取大量除草剂抗性基因G的拷贝，一般采用技术进行扩增，扩增时，冷却至55～60℃的目的是。在用除草剂抗性基因G与Ti质粒构建基因表达载体的过程中，用到的工具酶有。
3. （2） 将含除草剂抗性基因G的重组Ti质粒转入农杆菌，为提高基因表达载体进入农杆菌的效率，需要用Ca²⁺处理细胞，其目的是。在“筛选1”中含氨苄青霉素的培养基能将成功导入表达载体的农杆菌筛选出来，而含无色物质K的培养基却不能，原因是。
5. （3） 利用进行筛选2，更易于获得抗除草剂的转基因植株。从步骤①到步骤②需要更换新的培养基，原因是。