1. (2023高三上·江阴期末) 我国科技工作者发明的维生素C“二步发酵法”生产工艺是世界首创。第一步发酵用醋酸杆菌为菌种，第二步发酵用氧化葡萄糖酸杆菌（“小菌”）和假单胞杆菌（“大菌”）混合菌种。如图为二步发酵法的生产流程，请回答下列问题：

1. （1） 为纯化和保存菌种，取适量一步发酵液稀释后用法接种在含有碳酸钙粉的培养基上，以（填下列选项代号）为最佳指标，分离保存菌种。

   A．菌落直径大小 B．溶钙圈大小 C．溶钙圈直径与菌落直径比值

3. （2） 对一步发酵培养液检测发现几乎没有杂菌存在，推测可能的原因是。
5. （3） 二步发酵过程中大小菌的菌种数比例会影响产酸率，种液接入发酵罐前需对种液中的大小菌计数。计数所用的培养基除含有与发酵液相同的成分外，还需添加。在培养基上，可根据菌落的等特征（至少写两个）对大小菌分别计数。
7. （4） 某检测员将种液稀释接种了3个平板，统计假单胞杆菌的菌落数分别是30、100和200，取平均值110．该结果可信度低，原因是。
9. （5） 若要尝试固定化混合菌进行二步发酵生产古龙酸，应选择法进行固定。结合题意，你认为固定化混合菌操作时要注意哪些方面？（答出一点即可）。