1. (2024高三·汕头模拟) 镉（Cd）是重金属污染物，具有极强毒性。烟草作为重要的经济作物，在生长过程中容易富集Cd，Cd通过烟气进入人体，长期积累可能会引发疾病。N1NRAMP3是定位于液泡膜参与Cd转运的蛋白，研究人员以普通烟草为材料，通过转基因技术研究NINRAMP基因的功能，为研究烟草在Cd胁迫中的适应机制提供理论基础。回答下列问题：

1. （1） 从数据库获得NtNRAMP基因的序列，设计引物F和R后利用技术扩增得到NtNRAMP基因的cDNA片段，测序鉴定。使用AscI、SpeI和DNA连接酶等酶将NINRAMP连接到pCambia300-221质粒的T-DNA区域中（图为该T-DNA的左边界至右边界），得到重组质粒pCambia300-NtNRAMP。图示使用AscI、SpeI的过程是（填图中的数字）。

   

3. （2） 将pCambia300-NtNRAMP转入农杆菌，培养基中添加了琼脂与潮霉素，两者的作用分别是形成培养基以便得到单菌落、筛选。含pCambia300-NtNRAMP的农杆菌与烟草愈伤组织共培养，培养后得到12株烟草植株。提取烟草细胞的核DNA用引物F和R进行扩增，对转基因烟草进行鉴定。若扩增到特异性DNA片段，则说明。
5. （3） 上述烟草植株经PCR检测和电泳后，结果如图所示：

   

   注：CK为阴性对照；1~12为待检测植株；A为空白对照；B为pCambia300-NtNRAMP。

   为进一步研究转基因烟草在不同镉浓度胁迫下的NtNRAMP表达量变化，请从上述植株选取适宜的材料，简要写出实验探究思路（要求写出所选3株植株的编号）。