1. (2024高三下·广州模拟)  人乳铁蛋白（hLTF）是一种铁结合的糖蛋白，具有抑菌、提高免疫力等重要功能。研究者通过转基因技术培育能生产hLTF的奶牛，从牛奶中分离提纯hLTF，回答下列问题。

1. （1） 从原核生物中获取的质粒不适用于直接构建真核生物的表达载体，其启动子需要进行替换才有可能在真核细胞中表达，主要原因是。
3. （2） 研究人员采用小鼠乳清酸蛋白基因的启动子和终止子来替换pA 质粒中的部分序列，再拼接hLTF 基因，最终形成pW2-hLTF 重组质粒，过程如下图：

   

   注：Nrul、Mlul和Notl是三种限制酶，图中表示相应限制酶的识别序列和切割位点。pA、pW1、pW2和pW2-hLTF表示不同阶段的质粒。

   通过PCR 扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子、终止子和hLTF 基因时，均需引入限制酶的识别序列和切割位点，以便剪接到质粒的指定位置。据图分析，PCR 扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子所需的两种引物应分别包含、（限制酶）的识别序列，将修饰后的hLTF基因插入到重组质粒的启动子和终止子之间后，不一定能获得所需要的基因表达载体，原因是。

5. （3） 经检测筛选所获得的基因表达载体pW2-hLTF通过的方法导入到奶牛的受精卵细胞中，以获得能产生hLTF 的转基因奶牛。