1. (2024·贵阳模拟) 影印培养法是一种通过盖印章的方式，在一系列培养皿的相同位置上能出现相同遗传型菌落的接种和培养方法。下图是研究者利用大肠杆菌生产人生长激素的实验流程。所用的质粒含有限制酶（EcoR I、Pst I、Hind III）及切点如图所示，且三种酶切割形成的末端各不相同，而Amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^R表示四环素抗性基因。回答下列问题：

1. （1） 图中利用PCR扩增出人生长激素基因至少需要3次循环，该过程中需要的引物数量至少是个，引物的作用是；
3. （2） 过程③一般先用Ca²⁺处理大肠杆菌，使细胞处于一种能，完成该过程后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到固体培养基甲上，培养基甲属于培养基。形成菌落后用影印培养法，分别接种到培养基乙和丙的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。含有目的基因的大肠杆菌在培养基乙和丙上的生存情况是。
5. （3） 过程①、②选择的限制酶是，判断依据是。