1. (2024高三下·安顺模拟) 构建基因表达载体时，将动物E蛋白基因插入质粒pUC18的Amp^R内部，以期培育工程菌生成动物E蛋白。构建重组质粒及限制酶的识别序列如图所示。回答下列问题：

注：tetR为四环素抗性基因、Amp^R为氨苄青霉素抗性基因。

1. （1） 构建基因表达载体时，用限制酶EcoRV和PstⅠ切割质粒pUC18和含E蛋白基因的DNA片段后，选用（选“E.coli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）进行连接。将重组质粒pUC20导入大肠杆菌前，先用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是。
3. （2） 原核生物编码蛋白质时偏好使用GTG编码起始密码子，而真核生物偏好使用ATG。为驱动受体大肠杆菌E蛋白基因的高效表达，对E蛋白基因模板链3^'端的引物进行的改造，并优化E蛋白基因上游的序列以驱动转录。
5. （3） 初步获得的细菌含有质粒pUC18或质粒pUC20。为筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，配制A~C三种选择培养基进行初筛，结果如表所示：

   培养基	抗生素种类	菌落类型
   A	四环素	甲
   B	氨苄青霉素	乙
   C	四环素+氨苄青霉素	丙

   根据初筛结果，为获得目的菌，需从菌落类型中挑选多个单菌落分别接种到选择培养基进一步筛选。实验的思路和预期结果及结论：。