1. (2024高二下·肇庆期中)  人乳铁蛋白（hLTF）是一种铁结合的糖蛋白、具有抑菌、提高免疫力等重要功能。研究者通过转基因技术培育能生产hLTF的奶牛，从牛奶中分离提纯hLTF，回答下列问题。

1. （1） 从原核生物中获取的质粒不适用于直接构建真核生物的表达载体，其启动子需要进行替换才有可能在真核细胞中表达，主要原因是。
3. （2） 研究人员采用小鼠乳清酸蛋白基因的启动子和终止子来替换pA质粒中的部分序列，再拼接hLTF基因，最终形成pW2-hLTF重组质粒，过程如下图：  

   科学家常用PCR特异性地快速扩增目的基因，其原理是。

   PCR扩增过程中每次循环一般可分为。在扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子、终止子和hLTF基因时，均需引入限制酶的识别序列和切割位点，以便剪接到质粒的指定位置。据图分析，PCR扩增小鼠乳清酸蛋白基因的启动子所需的两种引物应分别包含（限制酶）的识别序列。

5. （3） 构建基因表达载体过程中，将修饰后的hLTF基因插入重组质粒的启动子和终止子之间后，不一定能获得所需要的基因表达载体，原因是。
7. （4） 经检测筛选所获得的基因表达载体pW2-hLTF通过的方法导入到奶牛的受精卵细胞中，以获得能产生hLTF的转基因奶牛。