1. (2024高二下·联合月考)  酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母的絮凝能力，有助于发酵后细胞和产物的分离，节约生产成本。科研人员为研究R基因对酵母菌絮凝性能的影响，用基因工程技术获得了R基因被敲除的酵母菌菌株，主要步骤如图(G418为一种氨基糖苷类抗生素)。请据图回答下列问题。

1. （1） 过程①采用PCR技术获取R基因左右两端的N片段和C片段，除了图中条件外，还需提供的是4种脱氧核苷酸、和含Mg²⁺的缓冲溶液。若引物2和引物4分别添加了Mlu I(限制酶)的识别序列，则引物1和引物3的5^'端分别添加的识别序列。
3. （2） 过程③中用法将构建的重组质粒导入酵母菌，再利用含的培养基筛选出重组酵母，再挑取单菌落进行PCR扩增，验证酵母细胞R基因是否被敲除，则扩增时选择引物组合是。
5. （3） 科研人员继续将野生酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接种到装有麦芽汁的锥形瓶中，一定条件下静置发酵7天，测定酒精发酵能力和絮凝能力，结果如表。

   指标种类	酒精发酵能力	絮凝能力
   野生酵母菌	4.5%	63.1%
   R基因敲除酵母菌	4.5%	83.1%

   ①酒精发酵期间，每个锥形瓶应注意保持条件和定期排气。

   ②实验结果表明，请判断R基因敲除酵母菌是否符合生产需求并说出你的判断依据：。

7. （4） 科研人员又将不同浓度梯度的R基因敲除酵母菌菌液和野生酵母菌菌液点样于含30g/mL钙荧光白(细胞壁抑制剂，破坏细胞壁的正常组装)的YPD培养基上，结果如图。推测R基因敲除酵母菌絮凝能力变化的原因是。