1. (2024高二下·台州期末) 玉米栽培种是由野生种进化而来，具有穗大、籽粒饱满的优点。但栽培种籽粒蛋白含量较野生种低。研究发现玉米籽粒蛋白质含量与T基因有关，T基因控制T酶的合成。野生种的T基因中发生一个碱基对替换突变为栽培种的t基因，由于碱基对的替换导致t基因产生了一个限制酶X的酶切位点。回答下列问题：

1. （1） 基因T和t的根本区别是。测序结果表明，基因T和t转录产物mRNA的部分碱基序列如图1所示。据图分析，导致栽培种籽粒蛋白质含量下降的直接原因是相关蛋白质的第位氨基酸种类发生改变（AUG为起始密码子，且不考虑蛋白质的剪切）。
3. （2） 为提高栽培种籽粒的蛋白质含量，向栽培种转入基因T，完善下述操作。

   ①第一步，用PCR技术扩增T基因。PCR扩增体系中需要加入酶、引物等，PCR产物可用凝胶电泳技术来鉴定。结果显示除T基因目标条带外，还出现了非目标条带。推测非目标条带产生的原因可能是（多选）。

   A.引物太短

   B.引物之间碱基互补配对

   C.退火温度太低

   D.模板出现差错

   ②第二步，构建重组DNA分子。为确保T基因在转基因植物中正常表达，其上下游序列需具备。

   ③第三步，将重组DNA分子导入受体细胞。

   ④第四步，检测目的基因及其表达产物。经检测，转基因栽培种体内T酶的合成量远超未转基因栽培种。据此分析转基因栽培种籽粒蛋白质含量将，可推知基因与性状的关系是。

5. （3） 转基因栽培种自交后代部分植株籽粒蛋白质的含量与未转基因相比没有变化，可能的原因是导入一个T基因成为杂合子，其自交后代出现现象。为筛选出转基因纯合子，科学工作者扩增自交后代体细胞中的T、t基因，用限制酶X处理后进行电泳，结果如图2所示。其中转基因栽培种纯合子的电泳结果对应图中（填“1”或“2”或“3”）。