1. (2024高三下·五华月考) CRISPR/Cas9 基因定点编辑技术可按照人们的意愿精准编辑任意靶基因，为培育优良的微生物菌种开拓了广阔的前景。该技术原理是由一条单链向导RNA引导 Cas9蛋白到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导 RNA 中 20个碱基的识别序列，可人为选择 DNA上的目标位点进行切割 (见图)、连接。回答下列问题：

   

1. （1） Cas9蛋白可对目标DNA进行定点切割，这与基因工程中的酶作用相似，二者都作用于键。
3. （2） 若通过CRISPR/Cas9 技术在目标基因中切除一个长度为200bp的片段， 要在DNA 水平上判断操作是否成功，可使用的技术手段是。CRISPR/Cas9技术在实际操作中可能会发生“脱靶”，即造成其他非目标序列被错误剪切，可能的原因是。
5. （3） 将编辑过的目的基因与质粒连接后可构建基因表达载体。基因表达载体上应具有以便重组 DNA 分子的筛选，还需具有复制原点、启动子和终止子。其中启动子是一段有特殊序列结构的DNA 片段，是的部位。有时为了满足应用需要，会在载体中人工构建，当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达。
7. （4） 将含有目的基因的表达载体导入大肠杆菌时，一般先用处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。