①获得HA2抗原基因产物。提取H9N2毒株RNA,经生成cDNA,根据HA2基因全序列设计进行PCR扩增。再将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,对目标条带进行,储存备用。
②构建重组质粒。根据HA2基因产物和pMD18质粒部分酶切位点(如下图),选择限制酶进行酶切,再用连接,得到重组质粒。
③导入乳酸菌。将重组质粒电转化导入乳酸菌细胞。重组菌株经过一昼夜表达,用技术检测目的蛋白特异性。
④疫苗试验。疫苗试验的过程中,将相似雏鸡随机分为三组,分别口服成功制备的重组乳酸菌疫苗、,以及不口服乳酸菌的雏鸡作为空白对照组。每隔7天免疫一次,每次连续3天,灌服21天后采集各组血清,检测水平。结果表明,诱导性重组乳酸菌具有良好的免疫效果。