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  • 1. (2024高二下·绍兴期末) 乳酸菌在传统发酵工业和现代发酵工业中都是必不可少的,随着科学技术的发展,乳酸菌还可应用于疫苗研发。回答问题:

    1. (1) 《齐民要术》中记载了酸奶的制作方法:“牛羊乳皆可作,煎乳四五沸便止,以消袋滤入瓦罐中,其卧暖如人体,熟乳一升用旧酪半匙,痛搅令散泻,煖良久以单布盖之,明旦酪成”。传统乳奶制作时,以牛羊乳(富含乳糖)为原料,添加旧酪半匙,目的是。制作过程中酸奶会凝固,原因是,引起pH下降,使酪蛋白沉淀。
    2. (2) 现代发酵工业采用大规模生产,对菌种的要求更高。为减少产生基因突变菌株的可能性,应选择稳定的菌种。同时对菌种进行产酸能力测定,在培养基中添加碳酸钙用于检测(碳酸钙反应后会产生透明圈),将稀释的菌液在固体培养基上,从相同大小的菌落中挑选菌落,保存备用。
    3. (3) 以乳酸菌为载体的菌体口服疫苗制备应用广泛。研究人员将H9N2禽流感HA2抗原基因导入乳酸菌诱导表达体系构建了重组乳酸菌。相关步骤如下:

      ①获得HA2抗原基因产物。提取H9N2毒株RNA,经生成cDNA,根据HA2基因全序列设计进行PCR扩增。再将PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,对目标条带进行,储存备用。

      ②构建重组质粒。根据HA2基因产物和pMD18质粒部分酶切位点(如下图),选择限制酶进行酶切,再用连接,得到重组质粒。

         

      ③导入乳酸菌。将重组质粒电转化导入乳酸菌细胞。重组菌株经过一昼夜表达,用技术检测目的蛋白特异性。

      ④疫苗试验。疫苗试验的过程中,将相似雏鸡随机分为三组,分别口服成功制备的重组乳酸菌疫苗、,以及不口服乳酸菌的雏鸡作为空白对照组。每隔7天免疫一次,每次连续3天,灌服21天后采集各组血清,检测水平。结果表明,诱导性重组乳酸菌具有良好的免疫效果。

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