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(2024高三上·广东月考)
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,由α链和β链(hCGβ)结合而成。近年研究显示,hCGβ可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞,与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点,如图为其制备的基本方案。回答下列有关问题:
注1:甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2:AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子,只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
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(1)
某未受孕女性被查出血清HCG含量大幅度升高,为明确原因,还需进行检测。
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(2)
当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时,可以发生同源切割,将目的基因直接插入。同源切割是一种代替酶将目的基因导入基因表达载体的方法。
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(3)
图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因,其目的是。阶段Ⅱ将环化质粒导入用处理的大肠杆菌,然后在含有的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
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(4)
为了检验目的基因是否融合成功,提取大肠杆菌中的质粒为模板,设计相应的引物对融合基因进行。
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(5)
阶段Ⅳ~Ⅴ过程,将处理后的酵母菌接种在不含组氨酸和氨苄青霉素,形成的酵母菌菌落即为目的菌株,将此菌株扩大培养后,离心取上清液,用法进行检测,若上清液中能检测到hCGβ蛋白,则说明hCGβ基因表达。
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(6)
从生产控制的角度分析,选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是。
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