1. (2025高三上·云南模拟) 嵌合抗原受体-T细胞（CAR-T细胞）疗法在人类肿瘤治疗中取得了重要突破。CAR-T细胞疗法是将CAR基因导入T细胞成为CAR-T细胞，通过CAR蛋白上的scFv肽链（小肽不足以发挥抗原作用，但能发挥抗体识别作用）特异性识别肿瘤细胞膜上的抗原，并通过CAR蛋白上的其它肽链结构激活CAR-T细胞继而杀伤肿瘤细胞。回答下列问题：

1. （1） 获得含有scFv肽链的单克隆抗体，流程如图。

      

   ①图中通过驱动细胞和测试细胞反复免疫小鼠产生抗体的过程属于（填“细胞”或“体液”）免疫，参与该过程的免疫细胞来源于小鼠骨髓。实验小鼠机体产生免疫应答的过程中，辅助性T细胞的主要作用是。该实验最适用于筛选（填标号）。

   A．大鼠肝细胞区别于兔肝细胞特殊抗原的抗体

   B．正常细胞区别于感染HIV细胞内特殊抗原的抗体

   C．衰老神经细胞区别于正常神经细胞抗原的抗体

   ②取第二组小鼠分离脾细胞，加入诱导脾细胞和骨髓瘤细胞的融合。

3. （2） CAR基因的构建，流程如下图。

      

   在设计添加CAR基因两端限制酶识别序列并与表达载体正确连接的过程中，必须考虑的有_________（填标号）。

   A . PCR使用的上、下游引物需含限制酶识别序列 B . CAR基因内可以含有引物所含限制酶识别序列 C . 限制酶识别序列需位于载体启动子、复制原点和标记基因内 D . 上、下游引物所含限制酶识别序列不同 E . CAR基因插入载体位点需位于启动子下游
5. （3） 从免疫学角度分析，如果用高特异性抗体DNA直接构建CAR基因，再通过载体导入T细胞并稳定表达，不但会使治疗效果大幅降低，同时还会。