1. (2019·烟台模拟) 用基因工程技术生产羧酸酯酶CarE)制剂的流程如下图所示。回答下列问题：

1. （1） ①过程所需的酶是。在构建基因表达载体过程中，构建的重组质粒上启动子的本质和作用是。
3. （2） 实现②过程常用PCR技术，该技术的前提是要有，以便合成引物。为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的5′端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是。
5. （3） 过程③将重组表达载体导入大肠杆菌时，首先用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是。然后将溶于级缓冲液与该大肠杆菌混合，在一定温度下完成转化。