1. (2020·惠州模拟) 科研人员培育了一种能够降解餐厨废弃物并生成乳酸的转基因毕赤酵母。基本思路是在乳酸脱氢酶基因（LDH）的单基因表达载体中逐个接入糖化酶基因（Ga）表达盒与α-淀粉酶基因（Amy）表达盒，构建出AGL-三基因表达载体，如图1所示：（ori为复制原点；Zeocin R为博来霉素抗性基因；）LDH-单基因表达载体①②GL-二基因表达载体AGL-三基因表达载体oriZeocin RLDHAmyGaBglⅡBamHⅠA．糖化酶基因表达盒BglⅡBamHⅠB．α-淀粉酶基因表达盒BglⅡBamHⅠ③C④D．基因重组毕赤酵母E．表达检测。

1. （1） 获取目的基因：利用PCR技术获得目的基因的过程中，需要在PCR反应体系中加入模板、Taq酶及。
3. （2） 将图1所示结构“导入”毕赤酵母后，要筛选出含有三基因表达载体的毕赤酵母的操作思路是：。
5. （3） 对筛选出的菌株进行进一步鉴定的方法有：（写出一种）。利用转基因毕赤酵母降解餐厨废弃物生成乳酸，既减少了环境污染，也降低了乳酸的生产成本，这符合生态工程中的原理。
7. （4） 构建三基因表达载体的难点在于构建目的基因的表达盒，图2LDH-单基因表达载体①②GL-二基因表达载体AGL-三基因表达载体oriZeocin RLDHAmyGaBglⅡBamHⅠA．糖化酶基因表达盒BglⅡBamHⅠB．α-淀粉酶基因表达盒BglⅡBamHⅠ③C④D．基因重组毕赤酵母E．表达检测为构建α-淀粉酶基因表达盒的示意图（糖化酶基因表达盒构建与之类似，此处省略）。

   注：pro为启动子；AOX TT为终止子；Bsp119Ⅰ、XbaⅠ、Bgl II、BamHⅠ为四种限制酶）LDH-单基因表达载体①②GL-二基因表达载体AGL-三基因表达载体oriZeocin RLDHAmyGaBglⅡBamHⅠA．糖化酶基因表达盒BglⅡBamHⅠB．α-淀粉酶基因表达盒BglⅡBamHⅠ③C④D．基因重组毕赤酵母E．表达检测

   

   操作➀的处理是：将质粒1与α-淀粉酶基因均用Bsp119Ⅰ与XbaⅠ两种不同的限制酶处理，然后拼接。与用一种限制酶切相比，优点是；在此之前，科研人员还利用点突变技术对α-淀粉酶基因序列进行了同义密码子替换（即不影响氨基酸序列）改造，推测其原因。操作➁中必需用酶对质粒2处理，才能获得能正常表达的α-淀粉酶基因表达盒。