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  • 1. 荧光蛋白(GFP)在紫外光下会发出绿色荧光,某科研团队将GFP基因插入质粒P中构建了重组质粒载体P0 , 用于基因工程中基因表达载体(P1)的筛选和鉴定。部分过程如下图所示,下表为部分限制酶的识别序列及切割位点。请回答下列问题。

    1. (1) 过程①中,用EcoRⅤ切割目的基因获得末端。
    2. (2) 过程②是利用技术,多次循环扩增DNA片段;根据P0上的限制酶切割位点,需要在目的基因两端重设限制酶切割位点,则在扩增目的基因时,设计的引物5'端序列必须是,以获得相应的黏性末端,便于P1的构建和筛选。
    3. (3) 过程③中,P0需用限制酶切割,才能与目的基因在酶的作用下形成P1
    4. (4) 为了筛选出含有P1的菌落,需采用添加的培养基进行培养,在紫外光激发下(选填“发出”或“不发出”)绿色荧光的菌落,即为含有P1的菌落。

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