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  • 1. (2021·河南模拟) 芽孢杆菌生长迅速,营养要求简单,且能形成抗逆性很强的芽孢。某实验小组欲以黄瓜灰霉病菌作为指示菌,从采集到的土样中分离芽孢杆菌,并从分离到的芽孢杆菌中筛选高效广谱拮抗菌(指一种菌能产生某种物质抑制另外一种菌的生存),其所需培养基和实验步骤如下。回答下列问题:

    (一)培养基

    PB培养基:用于病原细菌的培养和病原细菌拮抗菌的培养、筛选及保存。

    PDA培养基:用于病原真菌的培养和病原真菌拮抗菌的筛选。

    (二)实验步骤

    1. (1) 芽孢杆菌的分离和纯化

      准确称取10g土壤样品,加入到盛有90 mL的无菌水中,振荡静止后再用吸取10mL土壤悬液加到90 mL无菌水中,充分混匀,即得倍稀释液,然后依此类推逐步梯度稀释至适当浓度,取合适稀释度下的菌液,涂布接种于固体培养基上。根据菌落的(答三个)等特征,挑取不同形态的单菌落,作为待测原始菌株。

    2. (2) 拮抗菌的初筛——五点对峙法

      在PDA平板中心接种黄瓜灰霉病菌菌饼,四周等距离接种待筛选芽孢杆菌,25℃恒温培养,每个筛选实验重复3次,目的是。根据比较拮抗能力,从而保留拮抗效果优良的菌株。

    3. (3) 探究培养时间对抗菌物质的影响

      实验小组通过筛选找出了优良的芽孢杆菌菌株ch - 22,现欲探究培养时间对其产生的抗菌物质活性的影响,请简要写出实验思路:

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