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高中生物学
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综合题
1.
(2021高二下·常熟期中)
科研人员利用大肠杆菌构建了抗虫基因文库。最新研究发现漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有显著的杀虫效果,现以p-B质粒为载体,构建AH基因的cDNA文库。图1表示p-B质粒,其中Cm
r
表示氯霉素抗性基因,ccdB基因表达产物能抑制大肠杆菌DNA复制。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点,且不同种限制酶识别序列不同,其中AiuI、XbaI、SspⅠ和MfeⅠ识别的碱基序列和酶切位点分别是AG
↓
CT、T'
↓
CTAGA、AAT
↓
ATT、C
↓
AATTG。请分析并回答下列问题;
(1) 为获得AH基因的cDNA,先要从漏斗蜘蛛毒素肽分泌细胞中提取
。再通过
合成出AH基因的cDNA。若从漏斗蜘蛛其他组织细胞提取,则难以成功,原因是
。
(2) 若已知AH基因的cDNA两端部分序列为:5'—AACTATGCGC……CGTAGCCTCT—3',请写出PCR扩增该cDNA时的两个引物对应的局部序列(前10个碱基序列),并标明5'和3'端:
,
。一个初始双链cDNA经四轮循环后,共消耗这两种引物的数量为
个。
(3) 利用图中的质粒和AH基因构建重组质粒时,宜选用限制酶
双酶切质粒,再选用限制酶
切割目的基因,将切割后获得的DNA片段混合,经DNA连接酶处理后,再与大肠杆菌混合培养,在含有适量氯霉素的培养基中添加适量冷的
,以促进转化。
(4) 经上述处理培养后,其中能繁殖的大肠杆菌中应含有的质粒是
,原因是
。
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