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  • 1. (2021高二下·常熟期中) 科研人员利用大肠杆菌构建了抗虫基因文库。最新研究发现漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有显著的杀虫效果,现以p-B质粒为载体,构建AH基因的cDNA文库。图1表示p-B质粒,其中Cmr表示氯霉素抗性基因,ccdB基因表达产物能抑制大肠杆菌DNA复制。图中箭头表示相关限制酶的酶切位点,且不同种限制酶识别序列不同,其中AiuI、XbaI、SspⅠ和MfeⅠ识别的碱基序列和酶切位点分别是AGCT、T'CTAGA、AATATT、CAATTG。请分析并回答下列问题;

    1. (1) 为获得AH基因的cDNA,先要从漏斗蜘蛛毒素肽分泌细胞中提取。再通过合成出AH基因的cDNA。若从漏斗蜘蛛其他组织细胞提取,则难以成功,原因是
    2. (2) 若已知AH基因的cDNA两端部分序列为:5'—AACTATGCGC……CGTAGCCTCT—3',请写出PCR扩增该cDNA时的两个引物对应的局部序列(前10个碱基序列),并标明5'和3'端:。一个初始双链cDNA经四轮循环后,共消耗这两种引物的数量为个。
    3. (3) 利用图中的质粒和AH基因构建重组质粒时,宜选用限制酶双酶切质粒,再选用限制酶切割目的基因,将切割后获得的DNA片段混合,经DNA连接酶处理后,再与大肠杆菌混合培养,在含有适量氯霉素的培养基中添加适量冷的,以促进转化。
    4. (4) 经上述处理培养后,其中能繁殖的大肠杆菌中应含有的质粒是,原因是

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