1. (2022高二下·江苏期末) DDX5基因在细胞周期调控、肿瘤发生等方面发挥重要作用。研究人员运用CRISPR-Cas9基因编辑技术对口蹄疫病毒易感的PK-15细胞株中的DDX5基因进行敲除，为后续研究DDX5基因在病毒感染中的作用提供基础。请据图回答下列问题。

1. （1） 图1中，Ori是（酶）首先结合的核苷酸序列。构建CRISPR-Cas9表达载体时使用的工具酶主要有。 结合对图2中CRISPR-Cas9技术原理的理解，图1表达载体中需要插入两种sgRNA基因，原因是。
3. （2） 研究中先将CRISPR-Cas9表达载体导入大肠杆菌DH5a，再将菌液利用法接种到加有的细菌培养基上，待菌落长成后，直接挑取菌落加入到PCR反应系统中进行基因鉴定。PCR过程中不需要先提取细菌DNA的原因是。
5. （3） 研究中采用培养转化的大肠杆菌对CRISPR-Cas9表达载体进行扩增。与PCR相比，利用大肠杆菌进行目的基因扩增的优点有、。
7. （4） 取转化的PK15细胞悬液进行有限稀释，再接种到6孔培莽板上，一段时间后对各孔内的细胞株进行DDX5蛋白检测，结果如图（其中B-actin是真核细胞骨架蛋白）。对细胞悬液有限稀释法的目的是， 细胞培养时CO₂培养箱中充入的气体应是。 根据检测结果，敲除DDX5基因的细

   胞株编号有。