1. (2022高二下·温州期末) 回答下列（一）、（二）小题：

（一）中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。

回答下列问题：

1. （1） 为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。取10mL培养液加入90mL无菌水，混匀，静置后取上清液并稀释，将0.1mL稀释液接种于培养基上。10⁴倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95，则每毫升样液中微生物数量为个。此外，选育优良菌株的方法还有等。
3. （2） 基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60d以上。该系统不需要灭菌的原因是。
5. （3） 研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中可能是高密度培养的限制因素。
7. （4） 菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌。
9. （5）

   （二）如图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题：

   

   图中B过程是，cDNA文库（填“大于”“等于”或者“小于”）基因组文库。
11. （6） 为在短时间内大量获得目的基因，可用扩增的方法，此方法中的每次循环可分为延伸、退火三个步骤。
13. （7） 目的基因获取之后，需要进行，此步骤是基因工程的核心。
15. （8） 将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是，检测此基因在植物中是否表达成功，可以用技术进行检测。
17. （9） 如果要想使该酶活性更强或具有更强的耐受性需要对现有蛋白质进行改造，这要通过被称为第二代基因工程的蛋白质工程。首先要设计预期的蛋白质结构，再推测应有的氨基酸序列，找到相对应的。