1. (2023高三·浙江模拟) 番茄中含有丰富的番茄红素，具有较高的营养价值，科研人员拟将抗寒基因（目的基因）转入番茄红素高表达番茄的核基因组中，培育具有抗寒性状的番茄红素高表达番茄，且研究抗寒基因的导入是否影响此番茄中番茄红素的高表达。其基本过程包括目的基因的获取并形成重组DNA、将重组DNA导入农杆菌、受体材料的消毒、转化番茄细胞、番茄细胞大量培养及番茄红素的检测、植株再生和抗寒性状的鉴定等。回答下列问题：

1. （1） 为了获得目的基因，根据的原理，在冰川冻土中去寻找具有目的基因的细菌，提取并分离出抗寒基因；选用限制酶和DNA连接酶切割并连接形成重组DNA．关于限制酶选择的依据有哪些？。

   A．目的基因不能破坏     B．质粒上复制起点不能破坏     

   C．酶切后的黏性末端能互补连接     D．只能选择一种限制酶进行切割

3. （2） 将重组DNA导入农杆菌，并将受体菌接种在（“含”或“不含”）抗生素的培养液中，置于上慢速培养一段时间，使CaCl₂处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态，便于筛选。
5. （3） 取番茄的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70%酒精浸泡，再用浸泡，最后用无菌水冲洗，作为转基因的受体材料。
7. （4） 将消毒后的番茄叶片剪成小片，在导入目的基因的农杆菌溶液中浸泡后，取出并转移至添加有的MS培养基，使小叶先脱分化形成愈伤组织，适度分化形成特定的番茄细胞并大量培养，提取并检测番茄红素的含量，从而确定抗寒基因的导入是否影响番茄红素的高表达。能影响细胞的生长率和产物合成的因素有（至少答出两点）。
9. （5） 为了培育成植株，可将愈伤组织先后转移至发芽培养基和生根培养基，进一步发育形成完整植株；也可将愈伤组织，提取其中的胚性细胞发育形成，经培养可直接形成根芽，从而快速形成试管苗。然后将上述试管苗在适宜的光照、温度和80%以上的等条件下进行炼苗后室外大量栽培。为了鉴定，可提取叶片组织的DNA，采用PCR扩增技术。
11. （6） 为研究转基因番茄中抗寒基因是否成功表达，可有多种方法进行验证：

    ①取转基因番茄的体细胞，进行低温培养且处理，再用方法检测抗寒蛋白是否存在；

    ②将转基因植株和非转基因植株处于环境，若，基本能确定抗寒的番茄培育成功。