1. (2023高三下·宁波模拟) 蜂毒前溶血肽原是prepromelittin基因(以下简称PL基因)的表达产物，在蜜蜂体内合成后首先加工成蜂毒溶血肽原(蜂毒肽前体蛋白)，被进一步水解形成分泌蛋白蜂毒肽。与蜂毒肽相比，蜂毒前溶血肽原具有较大的溶解度，且对细胞的破坏能力小，可利用基因工程方法合成蜂毒肽的前体产物。

1. （1） 生产蜂毒肽常选用微生物做受体细胞，优点是(答出两点即可)；原核细胞(填"能"或“不能")将蜂毒溶血肽原加工成蜂毒肽，原因是。
3. （2） 为了解决(1)中的问题，对蜂毒前溶血肽原基因进行改造(如下图1)，以便后期用羟胺(一种能专一性裂解特定两个氨基酸之间肽键的化合物)对生产出的蜂毒前溶血肽原进行加工。根据图1推测羟胺的识别位点是。为实现最终生产有活性的蜂毒肽，与原DNA序列相比，改造后的序列末端还删除了Gly的对应编码链序列，推测删除的理由是。改造后的DNA编码区序列长度为bp

   

   注：①阴影：蜂毒肽序列；方框：Asn-Gly位点；

   ②图1中所示的“原DNA序列”为蜂毒前溶血肽原的编码区序列的编码链；

   ③甲硫氨酸，缩写为M，由起始密码子AUG编码；丙氨酸(Asn)，缩写为N；

   ④甘氨酸(Gly)，缩写为G，由密码子GGU、GGC、GGA、GGG编码。

   ⑤终止密码子UAA、UGA和UAG

5. （3） 根据改造后的基因序列，利用人工化学合成方法进行全基因合成，设计并合成引物对合成基因进行PCR扩增，引物序列的长度越长、GC含量越高，PCR过程中退火温度的设定值越。将PCR产物和pGEX-4T-1载体利用酶进行基因表达载体的构建，获得蜂毒前溶血肽原与GST(一种标签蛋白)融合表达重组质粒pGEX-4T-1/PPMe.(见图2)。扩增PL基因时设计了引物对M1和M2，其中M1的部分序列是：5'-GAATTC-3'且EcoRI的识别序列是GAATTC，请续写出该引物的后8个碱基5'3'。

   

7. （4） 将重组表达载体转化至(“含有”或“不含有”)pGEX-4T-1/PPMel的大肠杆菌的感受态细胞，借助PCR和电泳鉴定是否转化成功：凝胶中DNA分子的迁移速率与有关(答2点)。
9. （5） 若培育相应的转基因植物；常用农杆菌转化法，需将目的基因插入质粒的中，最后通过植物组织培养技术培育转基因植株。