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  • 1. (2023高三上·长沙月考)  纤毛是广泛存在的细胞表面结构,功能异常可引起多种疾病。因此,研究纤毛形成的作用机制具有重要意义。请回答下列问题。

    1. (1) 纤毛结构如图1所示,由细胞膜延伸形成的纤毛膜主要由组成。基体由中心体转变而来,中心体在有丝分裂中的功能是
    2. (2) 某病人肾小管上皮细胞纤毛异常,为了分析纤毛相关基因X是否发生了变异,对基因X进行了PCR扩增与产物测序。从细胞样品中分离DNA时,可通过交替调节盐浓度将与核蛋白结合的DNA分离出来,溶液中添加NaCl至2.0mol/L的目的是。PCR扩增时,需在催化下,在引物端进行DNA链的延伸,获得扩增产物用于测序。
    3. (3) 为研究蛋白质X在细胞中的定位,构建绿色荧光蛋白GFP与X的融合蛋白,融合蛋白具有绿色荧光,可示其在细胞内位置。将X-GFP基因融合片段M导入如图2所示载体质粒Y,构建Y-M重组质粒(在EcoRV位点插入片段)。请根据相关信息完成下表中的内容。

       

                                                                                                                                                                                                                                                               

      限制酶

      识别序列

      序列编号

      Y-M连接处测序后部分序列

      BamHⅠ

      G↓GATCC

      Q1

      5′…AGATCTCCGATATT…3′

      EcoRV

      GAT↓ATC

      Q2

      5′…AGATCTCCAAGCTT…3′

      HindⅢ

      A↓AGCTT

      Q3

      5′…AAGCTTCCGGATCC…3′

      BgⅡ

      A↓GATCT

      Q4

      5′…AAGCTTCCGATATC…3′

      图3

                                                                                                                            

      分步实验目标

      简易操作、结果、分析

      PCR鉴定正向重组质粒Y-M(图2中融合片段M中有白色的箭头,代表方向)

      ①选择图2引物

      ②PCR目的产物约为bp。

      确保M及连接处序列正确,Y-M的连接处上游含有HindⅢ+ EcoRV的识别序列,下游含有EcoRV+ BamHⅠ的识别序列

      ③质粒测序,图3中正确的是(选填序列编号)

      检测融合蛋白定位

      ④对照质粒Y-GFP(仅表达GFP)与实验质粒Y-M分别导入细胞,发现对照组整个细胞均有绿色荧光,而实验组荧光集中在纤毛基部,说明

    4. (4) 为研究另一纤毛病相关基因Z表达的变化,采用荧光定量PCR法检测健康人与病人基因Z的转录水平。采集样本、提取总RNA,经形成cDNA作为模板,PCR扩增结果显示,在总cDNA模板量相等的条件下,健康人Ct值为15,而病人Ct值为20(Ct值是产物荧光强度达到设定阈值时的PCR循环数)。从理论上估算,在PCR扩增20个循环的产物中,健康人样品的目的产物大约是病人的倍。

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