1. (2023高三上·重庆市开学考) 营养缺陷型菌株是指野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子后才能生长的菌株，包括氨基酸缺陷型菌株、维生素缺陷型菌株和碱基缺陷型菌株等。筛选营养缺陷型菌株的常规步骤为：诱变育种→淘汰野生型→检出缺陷型→鉴定缺陷型。

1. （1） 用紫外线诱变大肠杆菌，诱变后常采用选择培养基淘汰野生型大肠杆菌，使营养缺陷型大肠杆菌得以富集。培养大肠杆菌时，需将培养基的pH调至性，再在压力和温度分别为的条件下进行高压蒸汽灭菌。
3. （2） 夹层平板培养法可用于营养缺陷型菌株的检出，其原理如图1所示，先在培养皿上倒一薄层基本培养基，凝固后再接种一层诱变处理的菌液，其上再浇一层基本培养基，凝固后放入中培养出菌落，再倒一层完全培养基继续培养。若结果如图2所示，其中菌落（填“A”或“B”）即为检出的营养缺陷型大肠杆菌菌株。

   

5. （3） 研究小组一利用生长图谱法初步确定检出的营养缺陷型大肠杆菌的类型，即在基本培养基乙的A～E这5个区域中分别添加不同的营养物质，然后用法将检出的营养缺陷型大肠杆菌接种在图3培养基上，若培养一段时间后在图3的BC交界处长出了菌落，则说明该菌株是。

   

   a．氨基酸缺陷型菌株b．维生素缺陷型菌株c．碱基缺陷型菌株

7. （4） 研究小组二用上述方法鉴定了某菌株属于维生素营养缺陷型，为了进一步确定该菌株的具体类型，他们把15种维生素按照不同组合分为5个小组，用5个滤纸片分别蘸取不同小组的维生素，然后覆于接种后的琼脂平板上培养一段时间。

   

   组别	维生素组合
   1	维生素A	维生素B1	维生素B2	维生素B6	维生素B12
   2	维生素C	维生素B1	维生素D2	维生素E	烟酰胺
   3	叶酸	维生素B2	维生素D2	胆碱	泛酸钙
   4	对氨基苯甲酸	维生素B6	维生素E	胆碱	肌醇
   5	生物素	维生素12	烟酰胺	泛酸钙	肌醇

   若观察到1组和2组滤纸片周围产生生长圈（图4），则该营养缺陷型大肠杆菌不能合成的维生素是；若菌株为叶酸和生物素的双营养缺陷型大肠杆菌，则其在图4培养基上形成菌落的位置是。