1. (2024高一下·岳麓开学考) 动脉粥样硬化（atherosclerosis，As）是多种心脑血管疾病的主要诱因之一。研究表明，血管内皮细胞（HUVEC）受到氧化损伤是多种心血管疾病尤其是As形成和发展的主要病理原因。科学家发现Klotho蛋白可能与细胞的损伤修复及衰老调节有关，因此对Klotho蛋白进行了一系列的相关实验。

实验一：为探究Klotho蛋白对氧化损伤的细胞是否具有修复作用及修复作用是否通过丝氨酸一苏氨酸蛋白激酶（AKT）信号通路发挥作用，科学家运用以下实验材料的部分设计了一个实验。

实验材料：未被H₂O₂氧化损伤的HUVEC、H₂O₂氧化损伤的HUVEC，浓度分别为1、10、100μg/LKlotho蛋白溶液，1：1000的AKT抑制剂。

实验设计如下表所示：

组别	A	B	C	D	E	F
实验处理	未被H2O2损伤的HUVEC	H2O2损伤的HUVEC	H2O2损伤的HUVEC+1μg/Lklotho蛋白溶液	H2O2损伤的HUVEC+10μg/Lklotho蛋白溶液	H2O2损伤的HUVEC+100μg/Lklotho蛋白溶液

实验结果如下：

1. （1） F组的实验处理是。
3. （2） 与A组相比，B组的自变量是，设置B组的目的有两个，一是和A组相比，确定H₂O₂损伤模型制备是否成功；二是。
5. （3） 实验一可得出的结论是。

   实验二：离心收集实验一中处理过24小时的HUVEC细胞培养液的上清液，分别检测各组上清液中LDH、MDA、SOD、GSH的含量变化，结果如下：Klotho蛋白对H₂O₂氧化损伤后HUVEC抗氧化指标的影响（n=6）

   分组	LDH（kU/L）	MDA/（μmol/g pro）	SOD（kU/g pro）	GSH（kU/g pro）
   A	0.34	3.45	235.72	103.56
   B	1.28	8.88	73.57	51.24
   C	0.84	7.83	98.91	62.81
   D	0.61	6.34	136.82	73.57
   E	0.47	4.57	188.39	89.37
   F	0.99	7.92	89.45	44.55

   注：LDH为乳酸脱氢酶，一种胞内酶；MDA为膜脂过氧化产物丙二醛，其含量反映细胞膜被氧化的强弱；SOD和GSH均为细胞内的抗氧化酶。

7. （4） 上清液中LDH量的多少可以反映氧化损伤后细胞膜的完整性，同时MDA作为机体脂质过氧化的最终产物能够反映机体受活性氧氧化损伤程度。实验二LDH和MDA结果表明：Klotho蛋白有助于。细胞内的SOD和GSH作为抗氧化酶，能对抗氧化应激造成的细胞损伤并修复损伤细胞，其活性可以反映机体抗氧化系统能力。实验二中SOD和GSH结果表明：Klotho蛋白有助于。

   实验三：离心收集实验一中处理过24小时的HUVEC，用一定方法提取、分离并检测各组细胞中Bcl-2、Bax、AKT、p-AKT、NF-kBp65及β-actin的相对表达量（图中线条颜色越深，蛋白含量越多），结果如下：

   

   注：Bcl-2、Bax是与细胞凋亡相关的蛋白；p-AKT为磷酸化的AKT。

9. （5） 根据实验三的结果，下列说法正确的是（ ）

   A . Klotho蛋白能通过减少细胞凋亡从而对氧化损伤的HUVEC发挥保护作用 B . Bax可能作为促凋亡因子诱导细胞凋亡发生 C . Klotho蛋白抑制氧化损伤后的HUVEC细胞凋亡，可能是通过抑制Bcl-2及促进Bax蛋白表达而发挥作用的 D . Klotho蛋白可通过提高p-AKT/AKT水平对抗受损细胞的凋亡 E . NF-kBp65与p-AKT在对抗细胞凋亡方面具有协同作用