1. (2024高一下·珠海期中) 番茄红素具有一定的抗癌效果。普通番茄合成的番茄红素易在番茄红素环化酶的催化作用下转化。科学家利用基因工程设计的重组DNA（质粒三）能表达出双链RNA（发卡），番茄细胞可识别双链RNA并将该双链RNA和具有相同序列的单链RNA一起降解，从而阻止番茄红素的转化，提高番茄红素的产量。下图为利用质粒一和目的基因构建重组质粒三的过程示意图。请回答下列问题：

1. （1） 该基因工程中，“目的基因”是基因，要想对该目的基因进行体外扩增，可从番茄组织中提取mRNA，通过逆转录获得用于PCR扩增。PCR扩增目的基因，需要设计相应的引物，设计引物时要避免引物之间出现。
3. （2） PCR扩增时，DNA先在高温下键断裂，双链解链，然后在温度缓慢下降的过程中，引物与解开的链结合，这个过程叫做退火。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。长度相同但的引物需要设定更高的退火温度。
5. （3） “质粒二”利用开环。为了防止其自身环化，要去除开环的质粒两端的个磷酸基团。
7. （4） 构建质粒三时，最好在目的基因A、B两端分别加识别序列，目的是。
9. （5） 对于培育成功的转基因番茄植株，“发卡”在细胞内可以阻止过程，从而使番茄红素环化酶基因“沉默”。