1. (2024·全国甲卷) [生物-选修3：现代生物科技专题]

某同学采用基因工程技术在大肠杆菌中表达蛋白E。回答下列问题。

1. （1） 该同学利用PCR扩增目的基因。PCR的每次循环包括变性、复性、延伸3个阶段，其中DNA双链打开成为单链的阶段是 ，引物与模板DNA链碱基之间的化学键是 。
3. （2） 质粒载体上有限制酶a、b、c的酶切位点，限制酶的切割位点如图所示。构建重组质粒时，与用酶a单酶切相比，用酶a和酶b双酶切的优点体现在 （答出两点即可）；使用酶c单酶切构建重组质粒时宜选用的连接酶 。

   

5. （3） 将重组质粒转入大肠杆菌前，通常先将受体细胞处理成感受态，感受态细胞的特点是 ；若要验证转化的大肠杆菌中含有重组质粒，简要的实验思路和预期结果是 。
7. （4） 蛋白E基因中的一段DNA编码序列（与模板链互补）是GGGCCCAAGCTGAGATGA，编码从GGG开始，部分密码子见表。若第一个核苷酸G缺失，则突变后相应肽链的序列是 。

   氨基酸	密码子
   赖氨酸	AAG
   精氨酸	AGA
   丝氨酸	AGC
   脯氨酸	CCA
   	CCC
   亮氨酸	CUG
   甘氨酸	GGC
   	GGG
   终止	UGA