1. (2024高二下·徐州期末) 放线菌主要存在于土壤、空气和水中，还有部分存在于健康植物的各种组织和器官内部，称为植物内生放线菌。请回答下列问题：

1. （1） 放线菌能抑制病原菌的生长。研究人员利用两种不同类型的放线菌获得新型工程菌，过程如图所示。收集两种菌丝体，加入（填“纤维素酶”或“溶菌酶”）处理，获得原生质体，将两种原生质体悬液等量混合，加入适量促融剂处理一段时间。终止反应并洗涤后，取一定量混合液接种于（填“固体”或“液体”）培养基中培养。根据菌落特征，选出性状稳定的融合菌株。

   

3. （2） 某真菌的W基因可编码一种高效降解纤维素的酶，已知乙链为W基因转录的模板链，为使放线菌产生该酶，以图中质粒为载体，进行转基因。

   限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	MfeⅠ	KpnⅠ	HindⅢ
   识别序列和切割位点	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

   

   ①为了将W基因与质粒重组且避免质粒和W基因自身环化，最好选择用限制酶处理质粒、处理W基因。

   ②研究人员欲对W基因的mRNA进行RT-PCR，已知其mRNA的序列为5'-UGAACGCUA…（中间序列）…GUCGACUCG-3'。为了便于将扩增后的基因和载体成功构建成重组质粒，用于PCR扩增的引物应为。

   A.5'-TGAACGCTA…     B.5'-GAATTCTGA…

   C.5'-CGAGTCGAC…     D.5'-AAGCTTCGA…

   ③除引物外，PCR反应体系中还应加入含Mg²⁺的缓冲液、。扩增过程中预变性的目的为，子链的延伸方向为。

   ④除引物外，启动子通常具有物种特异性，在质粒中插入W基因，其上游启动子应选择（从“植物”“真菌”“放线菌”中选填）启动子。为确定导入重组质粒的放线菌是否具有降解纤维素的能力，研究人员将导入了重组质粒的放线菌接种在含有纤维素和的固体鉴别培养基上，若出现以菌落为中心的透明圈，则证明W基因成功表达。