1. (2024高三上·浙江开学考) PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究七鳃鳗PHB2蛋白抑制人非小细胞肺癌细胞增殖的原因，研究人员利用转基因大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题：

1. （1） 为获取PHB2基因，提取七鳃鳗细胞的总RNA，经过程得到cDNA，将其作为PCR反应的模板，再添加设计好的特异性引物、、等组分，即可进行扩增。
3. （2） 图甲为所用质粒载体。为使PHB2基因（该基因序列不含图甲中限制酶的识别序列）与质粒载体正确连接，在扩增的pHB2基因上、下游分别引入限制酶的识别序列。经这两种酶酶切后的pHB2基因和质粒可通过酶进行连接，以获得重组质粒。

      

   限制酶BamH I、EcoR I、Hind Ⅲ识别序列分别为G↓GATCC、G↓AATTC、A↓AGCTT（箭头所指为酶切位点）

5. （3） 转化前需用CaCl₂处理大肠杆菌细胞，目的是。
7. （4） 在筛选含重组质粒的大肠杆菌时，可先后用两种抗生素进行影印培养实验（即先将转化后的大肠杆菌接种到培养基A上，待长出菌落后使用无菌的绒毡布压在培养基A的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上），则培养基A上应添加的抗生素为。培养基B中存活菌落的细胞内（填“含”或“不含”）PHB2基因。
9. （5） 将纯化得到的pHB2蛋白以一定浓度添加到人非小细胞肺癌细胞培养液中，培养48小时后，检测处于细胞周期不同时期的细胞数量，统计结果如图丙。分析该蛋白抑制人非小细胞肺癌细胞增殖可能的原因是将细胞阻滞在细胞周期的（填“G₁”或“S”或“G₂/M”）期。