1. (2024高三下·宁波模拟) Ⅰ、裸鼠几乎不得癌症，其寿命可超过30年，同样大小的家鼠最长寿命为4年。为探究其原因，科研人员做了以下研究。

Ⅱ、Period2（Per2）基因是一种抑癌基因，干扰Per2基因表达有利于肿瘤细胞存活和促进肿瘤发生。p53肿瘤抑制因子是一个关键的转录因子，调节DNA修复、细胞周期、衰老凋亡等相关细胞途径，是抵抗癌症发病和进展的重要防御因子，并且是通过与癌蛋白MDM2负调控作用调节其功能。为探究裸鼠体内下调Per基因对人胶质瘤细胞U343细胞株中P53的可能调控机制，科研人员做了如下实验：

1. （1） 裸鼠胶质瘤模型构建：将裸鼠皮肤成纤维细胞置于培养箱进行体外培养，经检测发现其分泌大量粘稠的高分子量透明质酸（HA），可抑制细胞过度增殖。
3. （2） 研究者检测不同来源成纤维细胞中HA合成酶（HAS）的含量，结果如图1.另外，发现裸鼠组织的HA降解酶（HAase）的活性远低于人和小鼠。结合图文信息，分析裸鼠皮肤成纤维细胞分泌大量高分子量HA的原因是。

   

   结果显示，裸鼠胚胎期HA合成酶低表达，推测其意义是。

5. （3） 为进一步研究高分子量HA能否提高小鼠的寿命，研究人员进行了下列实验（图2）。

   

   NeoR：新霉素抗性基因；nmrHas2：裸鼠 HA 合成酶 2 基因；CE：cre 重组酶-雌激素受体融合基因     

   注：启动子仅启动相邻基因的表达

   ①通过转基因技术获得转基因小鼠A：为了将目的基因插入小鼠6号染色体的特定位点，需在其两端设计与6号染色体同源序列，实现同源序列之间的重组。由此获得的转基因小鼠A暂时无法表达HA合成酶2，原因是。

   ②B鼠为导入表达CE的纯合子，CE也插入6号染色体的相同位点。外源雌激素可诱导cre重组酶活化，活化的cre重组酶能识别并切除loxP位点间的序列。A、B鼠交配获得C、D鼠，请画出C鼠的基因组成情况。

   ③利用C、D鼠进行实验，测得实验组小鼠HA含量升高，癌症概率降低、炎症反应减少，寿命也得到了延长。请写出对照组的选材（“C”或“D”）及实验处理。

7. （4） 请简述本研究的应用前景。
9. （5） 培养U343细胞常在培养基中加入，一段时间后用消化，制成细胞悬液。
11. （6） 人工合成低表达Per2基因，以某种病毒作为运载体，构建重组DNA，导入到培养好的U343胶质瘤细胞中（实验组），同时还需要设置2组对照组，分别为：（对照组1）、空白对照组（U343）（对照组2）。
13. （7） 每组等量同龄健康裸鼠，皮下相同部位分别对应注入上述组别的U343细胞，适宜条件下培养，定期记录瘤体体积，记录到成瘤（体积达1000mm3）的时间，处死小鼠，取出瘤体，提RNA和蛋白质。

    实验结果：实验组小鼠成瘤时间短于两对照组，且相同时间内实验组瘤体体积大于两对照组。检测各组U343胶质瘤细胞中Per2 蛋白含量（各组mRNA含量关系同Per2蛋白含量关系），如图3所示。

    

    注：图中从左向右依次为实验组、对照组1、对照组2.

    由图3结果可知，细胞中GAPDH蛋白表达量相对稳定，在实验中可作为参照，作用是。该实验结果说明实验组Per2基因低表达体系构建成功。

15. （8） 已知当DNA损伤后，DNA检测点基因ATM被激活，随后诱发p53激活，而c-myc是原癌基因，p53可与c-myc的启动子相结合发生乙酰化反应，已知c-myc的转录，相关基因表达后蛋白检测如图4（各组mRNA含量关系同蛋白含量关系）

    

    注：图中从左向右依次为实验组、对照组1、对照组2.

    由图4可推测，Per2基因的作用为。下调Per基因对人胶质瘤细胞U343细胞株中p53的可能调控机制

17. （9） 综上，Per2基因低表达可明显促进胶质瘤的发生发展，请你提出一种可能的调控机制，导致胶质瘤的发生和发展。