Ⅱ.药品用具:胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、细胞培养箱、载玻片、盖玻片、光学显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片。
Ⅲ.实验原理:,根据这些变异细胞占全部培养细胞的百分数(以下称Q值),可判断该化学物质的毒性。
Ⅰ.制备细胞悬液:把小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎,转入锥形瓶中,加入胰蛋白酶液处理,使胚胎组织离散成单个细胞,再加入动物细胞培养液,制成细胞悬液。
Ⅱ.进行细胞培养:
①取标记好的A、B、C三个洁净的培养瓶,。
②向A、B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙,并将培养瓶摇匀。
③把三个培养瓶放在37℃(适宜温度)的细胞培养箱中培养。
Ⅲ.制作临时装片:
①当细胞繁殖到大约第8代左右时,同时从细胞培养箱中取出三个培养瓶,用胰蛋白酶液处理,使培养的细胞从瓶壁上脱落,再加入动物细胞固定液迅速杀死细胞,将细胞固定在不同的分裂时期。
②静置一段时间后,分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬液。滴在与培养瓶有相同编号的载玻片中央,加1-2滴一定浓度的 染色,3-5 min后,盖上盖玻片,制成临时装片。
Ⅳ.镜检和统计:把临时装片放在显微镜下,寻找处于 期的细胞,并与 小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片对比以确认发生上述变异的细胞,同时统计该期变异的细胞占细胞总数的百分数(Q值)。
培养瓶 | A | B | C |
Q值 | 1.3% | 12.5% | 0.1% |
实验结论: